一种针对b型流感嗜血杆菌的半合成糖结合疫苗（临床前研发阶段）

本文报道了一种新型半合成糖结合疫苗——4-TT的研发过程与全面评价。b型流感嗜血杆菌（Hib）可引发脑膜炎、肺炎和败血症等严重疾病，现有疫苗多基于从细菌中提取的荚膜多糖（CPS）与载体蛋白偶联而成，但因多糖结构复杂、批次间差异大，存在生产质控难、稳定性差等问题。为突破这一瓶颈，研究团队采用磷酰胺酯法（phosphoramidite method）构建了一套模块化化学合成策略，高效制备了1–12聚体共12种结构均一的Hib CPS寡糖（即PRP寡糖），所有产物均带有与已上市半合成疫苗Quimi-Hib一致的连接臂（2-(2-氨基乙氧基)乙氧基 linker 和末端马来酰亚胺-巯基 spacer），确保临床转化安全性基础。

首先，利用糖芯片技术对12种寡糖进行抗原性初筛，发现二糖、四糖、六糖、十一糖和十二糖均能被抗Hib抗体特异性识别，其中四糖（tetramer 4）表现出最优的IgG结合能力，且与已批准Hib疫苗诱导的抗体识别谱高度重合，提示其为关键保护性表位。随后，将四糖、六糖、八糖、十一糖和十二糖分别与破伤风类毒素（TT）偶联，制成糖结合疫苗，在兔模型中评估免疫原性。结果表明：四糖-TT（4-TT）诱导的IgG抗体水平最高，显著超过阳性对照（已上市Hib疫苗），且其抗体能高效结合活Hib菌体、激活补体介导的杀菌作用（SBA），效果优于其他偶联物。

进一步研究发现：在载体蛋白选择上，TT比CRM197更能增强免疫应答；在佐剂方面，即使不添加任何佐剂（如氢氧化铝），4-TT仍能诱导与已上市疫苗相当的抗体水平和杀菌活性；在剂量探索中，5 μg与20 μg寡糖剂量效果无显著差异，说明存在免疫应答平台期。小鼠实验进一步证实：无佐剂的4-TT不仅能激发高水平IgG（含IgG1/IgG2a/IgG2b/IgG3各亚型）和IgM，还能有效激活CD4⁺/CD8⁺ T细胞，并促进Th1/Th2双通路分化，实现体液与细胞免疫双重应答——这正是传统多糖疫苗难以达到的关键优势。

最后，在小鼠败血症模型中，研究创新性地运用活体显微成像（IVM）技术，实时观察疫苗抗体如何协助肝脏中的库普弗细胞（KCs）和肝窦内皮细胞（LSECs）快速捕获并清除血液中的Hib细菌。结果显示：4-TT诱导的抗体可高效介导病原体向肝脏富集，并显著提升KC/LSEC对细菌的识别与捕获效率，其保护效力与已上市疫苗完全相当。综上，4-TT是一种结构清晰、工艺可控、免疫原性强、保护效果优、且无需佐剂的下一代Hib候选疫苗，为后续临床试验奠定了坚实基础。